Cryo-Techniques

冷冻技术是一组稳定或“固定”标本用于显微镜观察的相关程序。在电解质浓度和蛋白质抗原性等生理条件下,将样品快速冷冻,以保持其细胞结构和组成。或者,样品可以在冷冻前轻轻固定和冷冻保护。这些技术保留了组织的天然结构,而没有与化学固定有关的人工制品。一些低温技术有助于膜和膜蛋白的研究。

低温技术的例子包括:

1.Cryo-ultramicrotomy-为TEM切割的超薄冰冻切片。一般认为是最敏感的透射电镜免疫制备技术。

2.冻结骨折样品被固定、冷冻、断裂,并在TEM中成像断裂表面的副本。通常在细胞或脂质悬浮液上进行。这是证明紧密连接存在的唯一方法之一。阅读更多关于冻结骨折

3.冻结的水分TEM一层薄薄的不固定的水样被迅速冻结,形成一层玻璃状的冰,样品悬浮在其中。这种技术常用于脂质体悬浮液的成像和记录病毒的图像以进行三维重建。

4.Cryosubstitution-该技术避免了室温脱水和树脂渗透的变性影响。样品被冷冻并转移到低温替代装置中,通常放置在-90°C的丙酮中。在这种低温下,升华型过程中的丙酮取代水冰,从而最大限度地减少对抗原性的不利影响。然后用特殊的低粘度树脂(如Lowicryl系列)渗透样品,用紫外光固化。