冻结骨折

在冷冻压裂过程中,样品被迅速冻结并在穿过组织的平面上裂开。这种骨折沿着组织的弱部分,例如膜或细胞器的表面。

在切割后,两个表面都遮住铂膜。该涂层产生表面的复制品。然后将复制品涂覆有碳,然后在透射电子显微镜中成像。

虽然有几种用于冻结骨折的用途,但最常见的是确定膜糖蛋白在一起结合细胞的紧密或闭塞结的存在。冻结是确定这种连接的唯一方法。

该方法对intremermery结构的研究也有益。

冻结裂缝的样品制备

  • 固定样品(通常是戊二醛)
  • 冷冻保修
    • 甘油,蔗糖,乙二醇,DMSO
  • 冻结样本
    • 冷冻原味
      丙烷(-187°C)
      液氮(-196°C)
      氟利昂12或22(-165°C)
    • 冷冻方法

      冷冻射精
  • 压裂
    • 双重复制与杯
    • -100°C 10-5托或更好
  • 蚀刻
    • 带来膜的浮雕
    • -100°C至-120°C
    • 0到60秒。(〜23Å/ sec。在-100°C)
  • 复制
    • 电阻加热(或电子束)蒸发
    • 铂铂20Å,碳200Å
    • 用石英晶体测量的厚度
  • 消化
    • 温暖的标本到室温
    • 次氯酸钠(漂白剂)
    • 硝酸,硫酸和铬酸
    • 1到4个小时
  • 用TEM网格拾取复制品和显微镜图像